Für den RAST wird das vermutete Allergen besonders vorbehandelt, sodass es als Verbindung (Konjugat) vorliegt. Das Allergenkonjugat wird mit dem Blutserum des Patienten vermischt. Anschließend wird ein radioaktiv markierter Antikörper hinzugegeben, der das gebundene IgE erkennt.

Durch Messung der Radioaktivität lässt sich dann die Menge an IgE bestimmen, die an das Allergenkonjugat gebunden haben, und damit die allergische Immunreaktion nachweisen. Die Ergebnisse werden in Klassen angegeben, die mit der Stärke der Konzentration korrelieren (0 = negativ; 1–4 = positiv).

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